特發(fā)性肺纖維化的發(fā)病原因尚不明確，患者的自然史差異很大，但肺功能快速下降會降低生活質(zhì)量，如果不進(jìn)行干預(yù)，最終導(dǎo)致死亡。目前IPF診斷后的中位生存期僅有2～5年，是相當(dāng)致命的一種疾病。近年來，隨著診斷的優(yōu)化和人群的老齡化，IPF的發(fā)病率和患病率呈現(xiàn)上升趨勢。針對IPF的治療目前并沒有特效的治療方法，主要是以糖皮質(zhì)激素為主的免疫治療、抗炎、免疫抑制、抗纖維化、抗氧化等手段，但治療效果有限，IPF相關(guān)疾病模型對該病的基礎(chǔ)研究及新藥開發(fā)具有重要價值，博來霉素誘導(dǎo)的肺纖維化模型，已被廣泛應(yīng)用于研究肺纖維化的發(fā)病機(jī)制和測試潛在的治療方法。

模型機(jī)制：博來霉素（Bleomycin，BLM）是一種從輪枝鏈霉菌中提取的抗生素，主要用于治療某些類型的癌癥，但其副作用之一是可能導(dǎo)致肺纖維化。博來霉素通過誘導(dǎo)DNA斷裂、產(chǎn)生自由基、引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或壞死，進(jìn)而誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)和纖維化。

圖1. 博來霉素（BLM）誘導(dǎo)動物肺纖維化作用機(jī)制

小鼠肺纖維化模型

種屬：SPF級C57/BL6雌性小鼠，體重約18~20g。

動物周齡：4-6 weeks

造模方法:

麻醉小鼠，仰臥固定于實驗臺上，頸部去毛后酒精消毒，切開皮膚，逐層暴露氣管，將1mL注射器經(jīng)兩氣管軟骨環(huán)間隙朝向心端刺入氣管，回抽無阻力，注入博來霉素（根據(jù)動物批次摸索最佳造模劑量，對照組注入等量的生理鹽水）。手術(shù)完畢后迅速將動物直立、旋轉(zhuǎn)，使藥液在肺內(nèi)分布均勻，動物清醒后常規(guī)飼養(yǎng)。

大鼠肺纖維化模型

種屬：SD雄性大鼠，體重約200~250 g。

動物周齡：6-8 weeks

造模方法:

大鼠麻醉后仰臥位固定，頭部后仰使氣管稍微蹦緊。碘伏棉球消毒，切口位置選擇頸部正中線上胸骨角上方0.5cm。使用鑷子繃緊皮膚縱向剪開皮膚、筋膜。依次暴露夾肌下緣、二腹肌后腹或胸骨舌骨肌，可見氣管的環(huán)狀軟骨。確認(rèn)氣管位置后，助手用小彎鑷于氣管左右兩側(cè)輕微抵夾固定。主刀者于兩環(huán)狀軟骨之間進(jìn)針，感覺到落空感后，針尖略微上挑，回抽無阻力后，快速注入博來霉素（根據(jù)動物批次摸索最佳造模劑量，對照組注入等量的生理鹽水）。助手立即將固定板抬高，同時主刀縫合皮膚。縫合完畢后，再次碘伏消毒切口，將大鼠上半身抬高60°放置一旁，同時注意保暖。

模型評價

       肺纖維化模型發(fā)展時間：博來霉素造模后第 7 天肺組織大多呈重度肺泡炎性改變，肺泡腔及肺間質(zhì)內(nèi)有大量中性粒細(xì)胞浸潤，部分肺泡腔破壞或消失，肺間隔內(nèi)成纖維細(xì)胞和毛細(xì)血管增生，與正常肺組織對比差別明顯。造模后第14天，肺纖維化開始形成。巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞明顯減少，成纖維細(xì)胞增多，肺泡間隔明顯增厚，有膠原沉積。造模后第28天，多數(shù)動物發(fā)生彌漫性肺間質(zhì)纖維化，肺間質(zhì)被膠原纖維和成纖維細(xì)胞替代，肺泡壁破壞，肺大泡形成，但仍可見炎性細(xì)胞浸潤。

檢測指標(biāo)：

      肺纖維化動物模型，通過蘇木精-伊紅(Hematoxylin Eosin, HE)染色和馬松（Masson）染色、測定羥脯氨酸(hydroxyproline, HYP)質(zhì)量分?jǐn)?shù)、檢測轉(zhuǎn)化生長因子β1(transform growth factor β1，TGF-β1)、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)等蛋白表達(dá)水平評價BLM誘導(dǎo)肺纖維化的作用效果或受試藥物的療效，探討可能的發(fā)病機(jī)制或藥物作用機(jī)制。

圖2. 小鼠肺纖維化HE染色圖譜

對照組

模型組

圖3. 小鼠肺纖維化Masson染色圖譜

對照組

模型組

模型特點：

●短時間內(nèi)快速成模（2-3 周可見典型病理）

●可重現(xiàn)性強(qiáng)

●病理組織學(xué)改變與人類肺纖維化相似。